Interaktivní endokrinologický průvodce.
Autor: Agata Zagrajczuk, DVM, PhD
Navržen tak, aby pomohl odpovědět na následující otázky:
- Co by se mělo testovat?
- Kdy by se měly odebírat vzorky?
- Jak by se měly interpretovat výsledky testů?
Rychlý průvodce pro výběr testu
| Klinický problém | Hormony | Vzorek | Kdy odebrat vzorky | Užitečnost | |
|---|---|---|---|---|---|
| Diagnostika nádoru z granulózních buněk | Anti-Mülleriánský hormon (AMH) | Sérum 0,5 ml | V jakékoli fázi estrálního cyklu nebo březosti | optimální (stanovení je doporučeno) |
|
| Testosteron (T) | Sérum 1 ml | Koncentraci může ovlivnit fáze reprodukčního cyklu/březosti a sezónní faktory (podrobnosti naleznete v sekci s informacemi o testech) | omezená – metoda je spolehlivá pouze v určitých případech* | ||
| Jiné poruchy ovariálních funkcí (anovulační cykly, neaktivita vaječníků, absence říjového chování) | Estradiol (E2) | Sérum 1 ml | V závislosti na fázi reprodukčního cyklu nebo dysfunkci lze očekávat zvýšení nebo snížení koncentrace. | posouzení fáze estrálního cyklu a aktivity vaječníků | |
| Progesteron | Sérum 0,5 ml | V závislosti na fázi reprodukčního cyklu nebo dysfunkci lze očekávat zvýšení nebo snížení koncentrace. | posouzení fáze estrálního cyklu a aktivity vaječníků | ||
| Potvrzení březosti Problémy s udržením březosti |
Progesteron | Sérum 1 ml | V závislosti na fázi cyklu nebo dysfunkci se očekává pokles nebo nárůst hladiny více než 15 dní po ovulaci | včasná diagnostika březosti a hodnocení funkce žlutého tělíska | |
| Sérový gonadotropin březích klisen (PMSG/eCG) | |||||
|
|
Mezi 40. a 120. dnem březosti | potvrzení březosti | |||
| Estron sulfát (E1S) | |||||
| Sérum 1 ml | Od 80. dne březosti do přibližně jednoho týdne před porodem | potvrzení březosti a posouzení funkce placenty* | |||
| Poměr DHP/Progesteron (Luteo-placentární posun) |
Sérum 1 ml | Přibližně 100 až 120 dní březosti | rozhodnutí o ukončení suplementace gestageny | ||
| Kryptorchismus / Poruchy funkce varlat | Anti-Mülleriánský hormon (AMH) | Sérum 0,5 ml | Bez ohledu na denní dobu / roční období | optimální (stanovení je doporučeno) |
|
| Testosteron (T) | Sérum 1 ml | Nejnižší hodnoty ráno a mimo připouštěcí sezónu; nejvyšší hodnoty odpoledne a během připouštěcí sezóny | omezená | ||
| hCG stimulační test u hřebců (2x měření testosteronu) |
Sérum (2x 1 ml) | Dva vzorky krve odebrané s odstupem 1-2 hodin | optimální (doporučeno v případě nejasných výsledků AMH) |
||
* Podrobnosti naleznete v popisech testů
Podezření na nádor z granulózních buněk
- Anti-Mülleriánský hormon (AMH)
- Testosteron (T)
Jiné ovariální dysfunkce
- Estradiol (E2)
- Progesteron
Posouzení březosti
- Progesteron
- Sérový gonadotropin březích klisen (PMSG/eCG)
- Estron sulfát (E1S)
- Poměr DHP/Progesteron
(Luteo-placentární posun)
Testikulární dysfunkce / kryptorchismus
- Anti-Mülleriánský hormon (AMH)
- Testosteron (T)
- hCG stimulační test u hřebců
(2x měření testosteronu)
Rychlý průvodce pro výběr testu
Účel: Diagnostika nádoru z granulózních buněk (GCT) u klisen a kryptorchismu / zbytků testikulární tkáně u samců; vyhodnocení po kastraci (
)
Místo produkce / fyziologická role:
granulózní buňky ovariálních folikulů (malé folikuly; snížená produkce AMH ve velkých preovulačních folikulech)
Sertoliho buňky semenotvorných kanálků v varlatech
Čas na vyšetření:
absence říje nebo nepravidelné cykly (březost a normální cyklická aktivita nevylučují GCT)
změny chování od nymfomanie až po chování podobné hřebci, ale často bez viditelných změn
obvykle jeden výrazně zvětšený vaječník, druhý vaječník neaktivní (pozor, nádory mohou být oboustranné)
vyšší pravděpodobnost u klisen starších 10 let, i když se může vyskytnout v jakémkoli věku
absence jednoho nebo obou varlat v šourku při současném chování podobném hřebci
plemenná predispozice ke kryptorchismu, zejména u amerického quarter horse a peršerona
Agresivní chování je často interpretováno jako známka nádoru z granulózních buněk nebo aktivní testikulární tkáně; studie však ukazují, že tato korelace je slabá. V takových případech poskytuje laboratorní diagnostika objektivní nástroj, užitečný zejména tehdy, když jsou výsledky zobrazovacích metod nebo palpace neprůkazné.
Vzorek: serum 0,5 ml
Metoda: ELISA
Odběr vzorku: nezávislý na fázi estrálního cyklu
| Interpretace | |
|---|---|
| Zdravé klisny | < 4 ng/ml < 28,6 pmol/l |
| Klisny s GCT | > 4 ng/ml > 28,6 pmol/l |
| Hřebci – aktivní tkáň varlat | > 0,27 ng/ml > 1,9 pmol/l |
| Kryptorchismus / samci s dysfunkcí varlat | < 0,27 ng/ml < 1,9 pmol/l |
Výhody: rychlý, rutinní test
Omezení: silná hemolýza – test bude zrušen, mírná hemolýza může způsobit zkreslení výsledků
Poznámka: Pokud jsou výsledky v rozporu s klinickým nálezem, doporučuje se test opakovat nebo potvrdit jinou metodou.
Účel: Diagnostika kryptorchismu / zbytků tkáně varlat a posouzení funkce varlat u samců; vyšetření po kastraci; diagnostika nádoru z granulózních buněk (GCT) u klisen
Místo produkce:
buňky hilu vaječníku a thekální buňky folikulu
Leydigovy (intersticiální) buňky ve varlatech
Čas na vyšetření:
nepřítomnost jednoho nebo obou varlat v šourku při současném chování hřebců
plemenná predispozice ke kryptorchismu, zejména u American Quarter Horse a Peršeron
nepřítomnost říje nebo nepravidelné cykly (březost a normální cyklická aktivita nevylučují GCT)
změny chování – zejména hřebčí chování (např. naskakování na jiné klisny), nymfomanie, což ukazuje na přítomnost thekální složky v GCT odpovědné za zvýšené koncentrace testosteronu
obvykle jeden výrazně zvětšený vaječník, druhý vaječník neaktivní (pozor, nádory mohou být oboustranné)
obvykle u klisen starších 10 let, i když se může vyskytnout v jakémkoli věku
Poznámka – Měření testosteronu má smysl pouze v případech, kdy je přítomna thekální složka spojená se zvýšenými koncentracemi tohoto hormonu. Její přítomnost lze předpokládat v případech somatické maskulinizace (tj. zvýšená svalová hmota, hypertrofie klitorisu, výrazný hřebčí krk) a/nebo hřebčího chování, tj. naskakování na jiné klisny a flehmenova reakce v přítomnosti klisen v období říje.
Agresivní chování je často interpretováno jako známka nádoru z granulózních buněk nebo aktivní tkáně varlat; studie však ukazují, že tato korelace je slabá. V takových případech představuje laboratorní diagnostika objektivní nástroj, který je obzvláště užitečný v případech, kdy jsou nálezy ze zobrazovacích vyšetření nebo z palpace neprůkazné.
Vzorek: sérum 1 ml
Metoda: RIA
Odběr materiálu:
u hřebců dochází k denním a sezónním výkyvům koncentrace
u klisen se koncentrace fyziologicky zvyšuje během říje
| Interpretace | |
|---|---|
| Hřebci/kryptorchismus – aktivní tkáň varlat | > 0,13 ng/ml > 130 pg/ml |
| Kryptorchismus / samci s dysfunkcí varlat | < 0,13 ng/ml < 130 pg/ml |
| Valaši | < 0,06 ng/ml < 60 pg/ml |
| Zdravé klisny | < 0,06 ng/ml < 60 pg/ml |
| Klisny s GCT | > 0,06 ng/ml > 60 pg/ml |
Výhody: relativně nízké náklady na stanovení
Omezení: obtížná interpretace – výsledky testosteronu u hřebců mohou občas vykazovat falešně nízké hodnoty, a to jak v důsledku denních výkyvů hormonu, tak kvůli odběru vzorků mimo připouštěcí sezónu (např. v zimě). Je třeba také poznamenat, že pohlavní dospělost (kolem 2 let věku) se nerovná plné chovné dospělosti – hřebci dosahují maximální hormonální funkce varlat až ve věku 4-5 let, i když je toto načasování individuálně variabilní. Pokud tedy hormonální výsledky neodpovídají klinickému nálezu, doporučuje se test opakovat nebo použít hCG stimulační test, který umožňuje přesné posouzení kapacity varlat produkovat testosteron.
Poznámka: Pokud jsou výsledky v rozporu s klinickým nálezem, doporučuje se opakované testování nebo potvrzení jinou metodou.
Účel: Posouzení funkce varlat a diferenciální diagnostika mezi kryptorchismem a valachy
Čas na vyšetření:
zlatý standard v případech neprůkazných výsledků bazálního testosteronu. Stimulační test má vyšší citlivost.
Indikace jsou stejné jako pro měření testosteronu, ale test je přesnější než stanovení bazálního testosteronu (T), protože poskytuje posouzení nárůstu T po stimulaci LH (hCG působí podobně jako LH a FSH, s převládající aktivitou podobnou LH). V důsledku toho významně (i když ne zcela) snižuje nejistotu spojenou s fyziologickými výkyvy koncentrací testosteronu.
Vzorek: sérum (2x 1 mL)
Metoda: RIA
Odběr materiálu:
Odebírají se dva vzorky krve. První (bazální) vzorek se odebírá před podáním hCG, poté následuje IV podání 5000-10000 IU hCG/koně a druhý vzorek krve se odebírá 1-2 hodiny po podání hCG. Vyšší koncentrace testosteronu lze pozorovat během připouštěcí sezóny.
Interpretace:
≥2 násobný nárůst ve srovnání s bazálním testosteronem indikuje přítomnost funkční tkáně varlat (hřebec nebo kryptorchismus)
Žádný významný nárůst indikuje valacha
Výhody: vyšší diagnostická přesnost než jednorázové (bazální) měření testosteronu
Omezení: možná opožděná reakce na hCG (po 120 minutách nebo později). Některé studie naznačují sníženou citlivost na hCG u hřebců mladších 18 měsíců a při testování v zimním období.
Účel: posouzení funkce žlutého tělíska, potvrzení ovulace, vyhodnocení fáze estrálního cyklu (říje vs. meziříjí), časná diagnostika březosti
Místo produkce / fyziologická role:
žluté tělísko (CL) vaječníku
Čas testování:
nepřítomnost říje nebo nepravidelné cykly
přibližně do 45.-60. dne březosti při posuzování funkce CL nebo při rozhodování o suplementaci altrenogestem
Měření progesteronu se nedoporučuje ve střední a pozdní fázi březosti.
po 100-120 dnech březosti u klisen je udržení březosti podporováno placentárními progestogeny jinými než progesteron
Vzorek: serum 0,5 mL
Metoda: CLIA
Odběr materiálu: závisí na účelu testování; je třeba vzít v úvahu fázi cyklu nebo březosti
Interpretace:
3,2 nmol/l (1,00 ng/ml) endokrinně aktivní CL (meziříjí / březost / perzistentní CL)
≥ 12,8 nmol/l (4,00 ng/ml) koncentrace progesteronu považovaná za bezpečnou v časné březosti
Výhody: rychlý, rutinní test
Omezení: obtížná interpretace – v časné březosti může docházet k výrazným výkyvům koncentrace progesteronu, které nemají diagnostický význam.
V případech rané embryonální mortality s perzistentním CL mohou koncentrace progesteronu stále indikovat březost. Výsledky by měly být vždy interpretovány ve spojení s ultrasonografickým nálezem.
Účel: Posouzení fáze estrálního cyklu a aktivity vaječníků. Zvýšené hladiny jsou pozorovány u březích klisen po 60. dni březosti. Výrazný nárůst koncentrace může také indikovat přítomnost perzistentního anovulačního ovariálního folikulu. Během tiché říje (silent oestrus) mohou být koncentrace estradiolu nižší než hodnoty pozorované během normálního estrálního cyklu.
Místo produkce / fyziologická role:
vaječník – preovulační folikul
Čas na vyšetření:
nepřítomnost říje nebo nepravidelné estrální cykly
Vzorek: sérum 1 ml
Metoda: RIA
Odběr materiálu: závisí na účelu vyšetření – je třeba vzít v úvahu fázi estrálního cyklu nebo březosti.
Interpretace:
< 10 pg/ml – malé folikuly, odpovídající fázi meziříjí (dioestrus) / časné folikulární fázi / sezónnímu anestru
11-15 pg/ml – střední folikuly (průměr cca 20-30 mm), odpovídající folikulární fázi
> 15 pg/ml – velký folikul (průměr ≥ cca 30 mm; preovulační folikul), odpovídající říji
> 30 pg/ml – podezření na nádor z granulózních buněk nebo perzistentní anovulační folikul
Výhody: rutinní vyšetření pro detekci subklinické folikulární aktivity vaječníků.
Omezení: Výsledky testu by měly být interpretovány ve spojení s ultrasonografickým nálezem.
Účel: potvrzení březosti mezi 40. a 120. dnem březosti. Neplatí pro oslice
Místo produkce / fyziologická role:
Produkován v endometriálních pohárkách (endometrial cups) – strukturách fethálního původu vnořených do děložní sliznice klisny, které vznikají v důsledku invaze buněk trofoblastu (embryonální tkáně) do endometria v časné fázi březosti. Koňský chorionický gonadotropin (eCG) vykazuje aktivitu jak FSH (převážně), tak LH, což vede ke vzniku přídatných žlutých tělísek u klisen přibližně mezi 40. a 45. dnem březosti. Tento mechanismus zajišťuje udržení dostatečně vysokých koncentrací progesteronu nezbytných pro zachování březosti, dokud tuto funkci nepřevezmou placentární progestogeny, tj. kolem 100. až 120. dne březosti. Působení eCG může u březích klisen občas nepřímo vést i k projevům říjového chování, protože eCG stimuluje růst folikulů, což má za následek zvýšenou produkci estradiolu odpovědného za příznaky říje.
Čas na vyšetření:
podezření/potvrzení březosti mezi 40. a 120. dnem březosti. V pozdějším stádiu dochází k regresi endometriálních pohárků.
Vzorek: sérum 1 ml (zchlazené)
Metoda: ELISA
Odběr materiálu: mezi 40. a 120. dnem po ovulaci
Interpretace: popisná
Výhody: rutinní test
Omezení: Možné falešně pozitivní výsledky – v případech odumření plodu, pokud nedojde k regresi endometriálních pohárků (perzistentní endometriální pohárky), mohou koncentrace eCG zůstat na úrovních indikujících březost. Byly hlášeny i případy perzistence endometriálních pohárků po 140. dni březosti; ty jsou však extrémně vzácné (cca 1-2 % klisen).
Účel: Diagnostika březosti od 80. dne u klisen a od 120. dne u oslic. Výsledky získané po 110. dni březosti u klisen jsou nejspolehlivější a klinicky nejužitečnější. Navíc poskytují informace o životaschopnosti plodu a funkci placenty.
Místo produkce / fyziologická role:
Placenta – vzniká syntézou z DHEA produkovaného v plodových pohlavních žlázách, přičemž sekrece se výrazně zvyšuje mezi 100. a 240. dnem březosti, poté začíná klesat.
Placenta přeměňuje DHEA na „březostní“ estrogeny, převážně estron sulfát.
Čas na vyšetření:
podezření/potvrzení pozdní březosti (od 80. dne po ovulaci)
podpůrně v případech: podezření na narušenou životaschopnost plodu nebo placentární insuficienci
Vzorek: sérum 1 ml
Metoda: RIA
Odběr materiálu: od 80. dne březosti (po ovulaci) do cca jednoho týdne před očekávaným termínem porodu
Interpretace:
Mezi 80. a 100. dnem po oplodnění indikují hodnoty >10 ng/ml březost.
Po 100. dni po oplodnění indikují hodnoty >100 ng/ml březost.
V případě negativního výsledku po 80. dni březosti je březost nepravděpodobná (citlivost testu 95-98 %).
Před jakýmkoli důležitým klinickým rozhodnutím se doporučuje provést klinické vyšetření.
Výhody: jeden z mála laboratorních parametrů, které jsou užitečné při posuzování stavu plodu a funkce placenty
Omezení: relativně dlouhá doba zpracování. Při posuzování funkce placenty a životaschopnosti plodu je náhlý, jasně diagnostický pokles koncentrace E1S detekovatelný až cca 2 dny před odumřením plodu/potratem.
Účel: určení časového bodu, kdy udržení březosti přebírají placentární progestogeny (luteo-placentární posun).
Místo produkce / fyziologická role:
progesteron – produkovaný žlutým tělískem (CL), odpovědný za udržení březosti přibližně do 100. dne.
DHP (5α-dihydroprogesteron) – hlavní progestogen produkovaný placentou s vysokou afinitou k progesteronovým receptorům a silnou biologickou aktivitou
Čas na vyšetření:
Pro podporu rozhodnutí o ukončení suplementace altrenogestem (mezi 100. a 120. dnem březosti) bez rizika předčasného vysazení farmakoterapie.
Výsledek přesně indikuje zrání placenty.
Opakovaná měření DHP u stejné klisny poskytují dodatečné informace o normální funkci placenty v pokročilé fázi březosti.
Vzorek: sérum 1 ml
Metoda: LC–MS (kapalinová chromatografie s hmotnostní spektrometrií)
Odběr materiálu: mezi 100. a 120. dnem březosti
Interpretace:
U nebřezích klisen nebo během časné březosti je poměr 5α-DHP/progesteron <1. Po luteo-placentárním posunu, kolem 100.-120. dne březosti, je poměr 5α-DHP k progesteronu >1.
Výhody: vysoce přesný test.
Omezení: Jakožto potenciální marker zánětlivých stavů placenty by měl být hodnocen pomocí opakovaných měření a interpretován společně s dalšími parametry.
Podezření na nádor z granulózních buněk
- Anti-Mülleriánský hormon (AMH)
- Testosteron (T)
Jiné ovariální dysfunkce
- Estradiol (E2)
- Progesteron
Posouzení březosti
- Progesteron
- Sérový gonadotropin březích klisen (PMSG/eCG)
- Estron sulfát (E1S)
- Poměr DHP/Progesteron
(Luteo-placentární posun)
Testikulární dysfunkce / kryptorchismus
- Anti-Mülleriánský hormon (AMH)
- Testosteron (T)
- hCG stimulační test u hřebců
(2x měření testosteronu)
Laboratorní diagnostika jednoduše









